loading...
علوم آزمایشگاهی واحد پزشکی تهران
فرزاد اسماعیلی بازدید : 2093 چهارشنبه 27 آذر 1392 نظرات (0)

گزارش کار آزمایشگاه میکروب شناسی 


آشنایی با انواع محیط های کشت 




محیط های متداول در کشت میکربی و نحوه تهیه آنها :

بطور کلی محیط های کشت باید دارای مشخصات معینی باشند و هنگام تهیه و استفاده از محیط کشتها باید به نکات زیر توجه شود :

تمام محیط کشتها باید واجد مواد غذایی ضروری برای رشد میکروبها باشند 
PH
محیط کشت باید در حد معین قبل از استفاده برای کشت تنظیم شود
ظروف مورد استفاده برای تهیه محیط کشتها باید کاملا تمیز و عاری از مواد خارجی باشند
آب مقطر مورد استفاده باید بطریقه صحیح تهیه شود
درجه حرارتی که برای استریل کردن محیط کشت مصرف می شود باید نسبت به نوع مواد غذایی مربوط در محیط کشت در نظر گرفته شود . درجات بالا باعث از بین رفتن برخی از مواد شیمیایی موجود در محیط کشت می شوند


محیط های کشت باکتریها به سه صورت زیر تهیه میشود : 



محیط کشت مایع یا آبگوشتی (liquid or broth media) 
محیط کشت جامد (solid media) 
محیط کشت نیمه جامد (semi solid media)


محیط کشت مایع ( براث ) :  این محیط فاقد آگار و فقط در لوله آزمایش یا فلاسک استفاده میشود . مثل محیط نوترینت براث.

نیمه جامد : 5% آگار دارد و برای تست حرکت باکتری ها استفاده می شود

جامد :   دارای ترکیبی به نام آگار که از جلبک قرمز دریایی تهیه می شود


محیط های کشت باکتری را از نظر نوع مواد تشکیل دهنده و از نظر کاربرد به چهار دسته تقسیم می کنند:

محیط کشت پایه (Basic Media) :


این محیط کمترین مقدار مواد غذایی برای رشد باکتریها را دارد . و مبنای تهیه انواع و اقسام محیطهای کشت می باشد . اکثر انواع باکتریها در آن رشد می کنند زیرا فاقد ماده ضد میکرب است . مانند محیط نوترینت آگار ، نوترینت براث


محیط کشت غنی کننده (Enrichment Media) :


محیط مقوی بوده که دارای مواد تغذیه ای زیادی نظیر ویتامین ها ، لیپید ها ، اسید های آمینه برای رشد باکتری است . بنابراین تعداد زیادی از باکتریها روی آن بخوبی رشد می کنند . مانند شکلات آگار، بلادآگار

محیط کشت افتراقی (Differential Media) : 


محیط کشت تشخیصی بوده که کلنی باکتریهای مختلف روی آن کاملا از همدیگر متمایز می گردد. مانند محیط E.M.B ، M.c این محیطها دارای املاح صفراوی ، قند و معرف شیمیایی هستند که باکتریهای لاکتوز مثبت برروی آنها کلنی های صورتی رنگ و باکتریهای لاکتوز منفی نظیر سالمونلا ، شیگلا بر روی این محیط ها کلنی های سفید رنگ تشکیل می دهند . از محیطهای افتراقی دیگر محیط TSI ، سیمون سیترات را میتوان نام برد . این محیط ها برای رشد باکتریهای گرم منفی روده ای (انتروباکتریاسه) مناسب هستند . چون وجود املاح صفراوی در محیط مانع از رشد باکتریهای گرم مثبت در محیط می شوند.


محیط کشت اختصاصی (Special Media) :


این محیطها برای رشد باکتریهای خاصی مناسبند . از این محیطها برای ایزوله نوع خاصی از باکتری در یک مخلوط میکربی استفاده می شود . مانند محیط s.s آگار که برای جدا کردن سالمونلا و شیگلا بکار میرود یا مانیتول سالت آگار که برای تشخیص گونه بیماریزای استافیلوکوکوس اورئوس استفاده می شود


محیط کشت انتخابی : (Selective Media )


محیط هایی وجود دارند که دارای یک ماده مهار کننده رشد می باشند این مواد رشد تمام ارگانیسم ها بجز ارگانیسم مورد نظر را مهارمی کنند . درمرحله اول از رنگ هایی که دارای خواص ضد میکروبی هستند استفاده می شود ودر مرحله بعد استفاده از آنتی بیوتیک ها و مرحله آخر شامل وارد کردن مواد ترکیبی به محیط کشت جهت فعالیتهای متابولیکی ارگانیسم مورد نظر می باشد . از آنجا ئیکه این محیط ها جهت ارگانیسم مورد نظر انتخاب شده اند و برای سایر ارگانیسم ها مضر می باشند آنها را محیط های انتخابی می نامند . مثالی از این نوع محیط ها ، محیط کشت فنیل اتیل الکل آگار است که از رشد باسیل های گرم منفی هوازی و بی هوازی اختیاری ممانعت بعمل آورده و به ارگانیسم های گرم مثبت اجازه رشد می دهد


انواع محیط های کشت 


محیط های کشت عمده ‌ای که در آزمایشگاه مورد استفاده قرار می‌گیرند عبارتند از : 


محیط نوترینت براث (Nutrient broth ):


این محیط مبنای ساخت اکثر محیطهای کشت است و از عصاره گوشت تهیه می‌شود طرز تهیه آن مثل نوترینت آگار می‌باشد . این محیط بدلیل نداشتن آگار بصورت مایع در لوله آزمایش تهیه می شود .


محیط نوترینت آگار (Nutrient agar): 


چنانچه ماده آگار را به نسبت 5/1 تا 2 درصد با آبگوشت غذایی مخلوط کنیم، این آگار غذایی بدست می‌آید . این محیط مبنای تهیه انواع و اقسام محیط های کشت جامد مثل Blood Agar , Chocolate agar می باشد .

محیط آگار خوندار (Blood agar) : 

اغلب نمونه های رسیده به آزمایشگاه میکروب شناسی بر روی محیط آگار خوندار کشت داده می‌شوند، چون این محیط از رشد تمام واغلب باکتریهای سخت رشد حمایت کرده و اغلب میکروب شناسان عادت دارند بر اساس مورفولوژی کلنی بر روی آگار خوندار تصمیم گیری نمایند . این محیط از یک محیط پایه مانند تریپتون که منشاء پروتئینی دارد، کلرید سدیم آگار و 5 درصد خون تشکیل شده است . برخی باکتریها آنزیم های خارج سلولی تولیدکرده که بر روی گلبول‌های قرمز عمل کرده و آنها راکاملاً لیز می‌کند (همولیزبتا ) یا یک تغییر سبز رنگ در اطراف کلنی ایجاد می‌کند ( همولیز ناقص یا آلفا ) در صورتی که برخی از باکتریها تغییری ایجاد نمی‌کنند ( همولیزگاما) تولید همولیزین بوسیله باکتری به بسیاری از فاکتورهای محیطی مانند PH ، اکسیژن و دما بستگی دارد. میکروب شناسان اغلب از مورفولوژی کلنی و تولید همولیزین به عنوان آزمایشات غربالگری اولیه جهت کمک به تصمیم در انتخاب مراحل دیگر جهت شناسایی یک باکتری استفاده می‌کنند. جهت مطالعه درست واکنش همولیتیک بر روی آگار خوندار، کارشناس بایستی پلیت را در مقابل نور گرفته و مشاهده نماید. اگر از لوپ جهت کشت خطی بر روی آگار خوندار استفاده می‌شود باید آنرا در آگار فرو برده ( Stabbing) تا ارگانیسم بتواند در زیر سطح محیط که اکسیژن کمتری دارد رشدکند . تولید همولیزین های حساس به اکسیژن در برخی از ارگانیسم ها بدین وسیله تشدید می‌گردد . به روش دیگر، می‌توان پلیت‌ها را جهت مشاهده واکنش همولیزین حساس به اکسیژن به طریق بی هوازی نیز انکوبه نمود


محیط مک کانکی (Mac conkey agar) :


مک کانکی آگار معمولترین محیط کشت انتخابی ـ افتراقی بوده ودارای رنگ کریستال ـ ویوله جهت ممانعت از رشد باکتریهای گرم ـ مثبت و اندیکاتور قرمز خنثی (Nautral red) جهت نشان دادن خصوصیات افتراقی می باشد . با سیل های گرم ـ منفی به‌آسانی بر روی این محیط رشدنموده و باکتریهای تخمیر کننده لاکتوز ، محصولات اسیدی تولید نموده که سبب کاهش PH در محیط اطراف کلنی می گردد . اندیکاتور قرمز خنثی در PH اسیدی قرمز رنگ می‌شود . پس میکروارگانسیم های لاکتوز ـ منفی بی رنگ و شفاف مشاهده می شوند . مک کانکی آگار محیط انتخابی و افتراقی مورد استفاده جهت گونه‌های شیگلا می باشد .
طرز تهیه محیط E.M.B و M.C مثل تهیه محیط نوترینت آگار می‌باشد .


.Mannitol salt agar


يك  محيط انتخابی براي تمايز استافيلوكوكهاي پاتوژن مانيتول سالت آگار است. غلظت بالاي نمك(7.5%) در اين محيط مانع از رشد بيشتر ميكروارگانيسمها مي شود.نه تنهااستافيلوكوك هاي پاتوژن مي توانند در اين محيط رشد كنند بلكه آنها در اين محيط اسيد هم توليد مي كنند.اين اسيد توليد شده به عنوان شاخصpH موجب تغيير رنگ محيط از قرمز به زرد مي شود. استافيلوكوك هاي غير باتوژن نيز قادر به رشد در اين محيط هستند ولي نمي توانند اسيد توليد كرده رنگ آن را تغيير دهند.

فرزاد اسماعیلی بازدید : 548 سه شنبه 26 آذر 1392 نظرات (0)
گزارش کار آزمایشگاه میکروب شناسی 

قسمت 2 : رنگ آمیزی گرم


رنگ آمیزی گرم


اصول:


در آزمايشگاه ميكروب شناسي باليني، رنگ آميزي گرم آزمايشي مهم براي تشخيص احتمالي سريع عوامل عفوني است و كيفيت نمونه هاي باليني را ارزيابي مي كند . اين آزمايش براي طبقه بندي باكتري ها بر اساس شكل، اندازه، مورفولوژي سلول و واكنش گرم آنها به كار مي رود.  

تفسير گسترش هايي كه رنگ آميزي گرم شده اند، با در نظر گرفتن مشخصه هاي رنگ آميزي ، اندازه، شكل و آرايش سلول صورت می گيرد. اين مشخصه ها ممكن است بوسيله بسياري از فاكتورها مانند مدت زمان ماندگی پليت ها، محيط کشت، اتمسفر انكوباسيون ، روش رنگ آميزي و وجود مواد مهاركننده تحت تأثير قرار بگيرند. براي تفسير اسميرهاي تهيه شده از نمونه هاي باليني مانند خلط، به وجود عوامل اضافي مانند انواع سلول هاي ميزبان و فاگوسيتوز نيز می بايست دقت نمود .






مواد:

A. معرف ها

معرف ها ممكن است به صورت تجاري خريداري شوند يا در آزمايشگاه تهيه گردند.

  1. كريستال ويوله
  2. يد

احتياط: يد خاصيت خورندگي دارد. از استنشاق، خوردن يا تماس آن با پوست خودداري كنيد.


  .c رنگ برها :

1)  كندترين رنگ بر:  اتانول  95 %

2)  رنگ بر متوسط: استون ـ الكل؛ مخلوطي از ml 100 اتانول 95%  و  ml100 استون (reagent grade ) را در بطري شيشه اي قهوه اي رنگ تركيب كنيد، با يك سال تاريخ انقضاء، برچسب بزنيد و در حرارت اتاق نگهداري كنيد.

3)  سريع ترين رنگ بر: استون  (reagent grade )

احتياط: اتانول و استون قابل اشتعال هستند.   

 Counterstains (رنگ متقابل)     :   سافرانين 

.B وسايل و مواد مورد نياز

1-  لام شيشه اي

2-  پي پت پاستور و اپليكاتور چوبي استريل

3-  لوپ ، آنس

4-  روغن ايمرسيون 

نكته: متانول را در بطري هاي درپيچ دار قهوه اي ذخيره كنيد. ذخيره كاري را مي توان در ظروف پلاستيكي براي حداكثر دو هفته ذخيره نمود .

 روش انجام آزمایش :

1) تهیه اسمیر :  برای تهیه اسمیر از لام های شیشه ایی نو و تمیز استفاده می کنیم  که 2 حالت دارد :

  • از محیط کشت جامد : 1 قطره سرم فیزیولوژی یا آب وسط لام میریزیم سپس با آنس از کلونی داخل پیپت برداشته و داخل آب حل می کنیم
  • از محیط کشت مایع : بوسیله لوپ لام میگیریم            

2) خشک کردن : یا روی میز یا نزدیک شعله خشک میکنیم


3) مرحله فیکساسیون : 3 بار به آرامی از شعله رد می کنیم که پروتئین ها دناتوره می شوند و به لام محکم می چسبند


4) رنگ آمیزی :


اولین رنگ : کریستال ویوله

مقداری از رنگ را با پیپت پاستور می کشیم و میریزیم روی لام و 1 دقیقه زمان می دهیم ، سپس لام را بر می گردانیم و میگیریم زیر شیر آب

سپس استون الکل که سبس حل شدن چربی های دیواره سلولی باکری می شود

باکتری های گرم مثبت : مانع خروج رنگ می شود

گرم منفی : با اضافه شدن استون الکل از حفره های دیواره اش رنگ خارج می شود

سپسس افارین اضافه میکنیم و پس از 30 ثانیه زیر آب شستشو می دهیم .

در گرم منفی ها : قرمز

در گرم مثبت ها : بنفش

نمونه های ازمایش :

گرم مثبت کوکسی : استافیلوکوک

باسیل گرم منفی : e-coli

 

فرزاد اسماعیلی بازدید : 1444 سه شنبه 26 آذر 1392 نظرات (0)

گزارش کار آزمایشگاه میکروب شناسی 

  

قسمت 1 : آشنایی با وسایل آزمایشگاه میکروب شناسی 



فيلدو پلاتين(Wire loop)  


وسيله ايست كه از يك ميله به طول 4 سانتي متر ساخته شده است و داراي سر و دسته مي باشد . جنس سر آن از پلاتين يل كروم است . اگر چنانچه سر آن به صورت حلقه باشد به آن فيلدو پلاتين حلقوي (Loop ) گفته ميشود كه از اين وسيله براي كشت دادن باكتري ها در محيط هاي مختلف و يا براي انتقال مقداري از كلني باكتري از يك محيط كشت به محيط كشت ديگر استفاده مي شود . اگر سر فيلدو پلاتين نوك تيز باشد به آن آنس (Once ) گفته ميشود كه از آن براي انتقال دادن باكتري ها و همچنين كشت دادن باكتري هادر محيط كشت هاي لوله اي (کشت های عمقی ) استفاده ميشود .

اگر سر آن گرد باشد به آن لوپ می گوییم برای انجام کشت های سطحی

در آزمايشگاه سر فيلدو پلاتين را پيش از كشت ، روي شعله استريل و در محيط بدون نمونه سرد ميكنند سپس نمونه برداري و كشت باكتري را انجام مي دهند.


اسلايد(Slide)


در كارهاي ميكروب شناسي لام هاي مختلفي مورد استفاده قرار ميگيرد . ساده ترين نوع لام از جنس شيشه و صاف است ،كه جهت رنگ آميزي باكتري ها استفاده ميشود . نوع ديگري از لام وجود دارد كه داراي يه قسمت گود است و به آن لام گوده دار ميگويند كه براي ديدن باكتري هاي زنده به كار مي رود .

لام ديگري به نام لام شمارش وجود دارد كه در قسمت وسط داراي مربعي است به ضلع يك ميلي متر با تقسيمات 12 تايي به عمق يك ميلي متر ، اين لام براي شمارش باكتري و گلبول هاي سفيد و قرمز خون و يا شمارش ميكروارگانيسم هاي كوچك در حجم مشخصي مورد استفاده قرار مي گيرد و به نام لام نئوبار موجود است .


لوله هاي كشت(Culture tubes)


انواعي از لوله هاي آزمايش در آزمايشگاه ميكروب شناسي مورد استفاده قرار ميگيرد . يكي از آنها لوله آزمايش معمولي است كه زيلد مورد استفاده قرار مي گيرد ، اين لوله ها براي رشد و تكثير ميكروارگانيسم ها در محيط كشت مصنوعي ( جامد يا مايع ) بكار مي رود . دهانه اين لوله ها را با پنبه مي بندند . دهانه بعضي از لوله ها به جاي پنبه ممكن است با فلز زنگ نزن مسدود نمايند . اين لوله ها را كه دهانه آنها بهتر بسته ميشود لوله آزمايش مورتون (Morton) گويند . براي بعضي لوله ها آزمايش ، به نام هاي در پيچي در هاي لاستيكي و پلاستيكي استفاده مي شود .


پيپت(Pipette) :


پاستور ( حجم های کم و بدون نیاز به دقت ) ، مدرج ( حجم های کم و دقیق )

يكي از وسايل شيشه اي مفيد در ميكروب شناسي كاربردي پيپت است كه براي انتقال مقدار معيني مايع از محيطي به محيط ديگر به كار مي رود . مايع براي جلوگيري از آلودگي به وسيله پيپت منتقل ميشود. پيپت لوله شيشه اي مدرجي است كه نوك باريكي دارد . در طرف ديگر قسمت دهاني است كه با مكيدن از آن ، مايع به داخل پيپت كشيده مي شود. با كنترل پيپت توسط انگشت نشانه ميتوان مقدار لازم از محلول مورد نظر را برداشت.


انكوباتور(Incubator)


دستگاهي است كه درجه حرارت مناسب رشد ، تكثير و تشكيل كلني را فراهم ميكند و درجه حرارت ثابتي را كنترل ميكند و چون اكثر باكتري ها پاتوژن هستند معمولا روي درجه حرارتي تقريبا برابر دماي بدن انسان 37 درجه سانتي گراد تنظيم ميشود.


بن ماري يا حمام آب گرم(Water bath)


يك وسيله نيمه پر شده از آب مقطر است. زماني كه نياز به حرارت غير مستقيم باشد ، از اين دستگاه استفاده ميشود كه روي درجه حرارت هاي گوناگون براي هدف هاي مورد نظر تنظيم ميشود .


ديسك هاي آنتي بيوتيك(Antibiotic disk)


ديسك هاي كاغذي حاوي دارو مي باشد كه براي تعيين ميزان حساسيت باكتري به انواع آنتي بيوتيك ها استفاده مي شود.


پلیت (Plate)


ظروفي هستند دو جداره ، كه در جدار كوچك محيط كشت باكتري ريخته ميشود و از جدار بزرگ به عنوان درب پليت استفاده ميشود. پليت ها ممكن است پلاستيكي ( يكبار مصرف ) و يا شيشه اي (با مصرف مجدد ) ساخته شوند . محيط در پليت ها به صورت جامد تهيه ميشوند كه داراي سطح كشت ميكروبي وسيع مي باشند.

پليت ها محلي براي رشد ميكروارگانيسم در كشت هاي ساخته شده ، مي باشند كه پس از كشت به صورت وارونه انكوبه ميشوند . اين عمل از جمع شدن آب در محيط كشت و پخش شدن كلني ها پيشگيري ميكند

فرزاد اسماعیلی بازدید : 504 چهارشنبه 20 آذر 1392 نظرات (0)

*جزوه بهداشت و اپیدمیولوژی*


جزوه بهداشت دکتر حاتمی که از وبلاگ خودشون برداشتم و ویرایش کردم به همراه پاور پوینت های بهداشت خانم نوری




اندازه فایل : 3.4 مگابایت

نوع فایل : فشرده/RAR


دانلود از سرور مدیافایر


فرزاد اسماعیلی بازدید : 367 سه شنبه 19 آذر 1392 نظرات (0)



امپریوپولز: یک مگاکاریوسیت و یک گرانولوسیت.


امپریوپولز در یک مگاکاریوسیت (مغز استخوان طبیعی).





Emperipolesis

به قرار گرفتن یک سلول درون سلول دیگر بدون اینکه آسیبی به آن‌ها برسد امپریوپولز می‌گویند. برای مثال ممکن است در مغزاستخوان سلول‌های مختلفی مانند پلاکت‌ها، لکوسیت‌ها و اریتروسیت‌ها بداخل مگاکاریوسیت‌ها فرو روند. امپریوپولز را می‌توان ورود سلول‌های مغز استخوان به سیستم کانالیکولار مگاکاریوسیت‌ نامید. در این حالت سیستم کانالیکولار به خارج مگاکاریوسیت باز شده و سلول‌هایی مانند نوتروفیل‌ها یا اریتروبلاست‌ها وارد آن شده و سپس سیستم کانالیکولار بسته می‌شود.
امپریوپولز در حالاتی مانند خونریزی، کم‌خونی‌های همولیتیک و برخی نئوپلاسم‌ها دیده شده و گمان می‌رود که سلول‌های بالغ خونی از این راه به شبکه وریدی مغز استخوان وارد می‌شوند

تعداد صفحات : 15

درباره ما
این وبلاگ با هدف ایجاد محیطی برای ارائه مطالب به روز علوم پزشکی و به خصوص علوم آزمایشگاهی با همکاری دانشجویان علوم آزمایشگاهی دانشگاه آزاد واحد پزشکی تهران راه اندازی گردید. امید وارم بنده حقیر را در هر چه پربار تر کردن این وبلاگ یاری کنید . و در کنار هم لحظات خوشی را سپری کنیم . بهترین نمایش وبلاگ با مرورگر های موزیلا و کروم است . . . . . ذکر منبع فراموش نشود !
اطلاعات کاربری
  • فراموشی رمز عبور؟
  • نظرسنجی
    سطح وبلاگ رو چطور میبینی ؟
    به نظر شما جامعه آزمايشگاهيان جهت تفهيم حساسيت و موقعيت خطير آزمايشگاه در نظام سلامت، به مسئولين و افراد تصميم گيرنده و سياست گذار چه ميزان تلاش كرده اند؟
    آمار سایت
  • کل مطالب : 145
  • کل نظرات : 195
  • افراد آنلاین : 2
  • تعداد اعضا : 392
  • آی پی امروز : 95
  • آی پی دیروز : 65
  • بازدید امروز : 125
  • باردید دیروز : 119
  • گوگل امروز : 7
  • گوگل دیروز : 1
  • بازدید هفته : 125
  • بازدید ماه : 958
  • بازدید سال : 20,499
  • بازدید کلی : 643,848
  • کدهای اختصاصی

    ابزار وبلاگ

    تماس با ما

    پشتیبانی





    Powered by WebGozar

    بانك اهداكنندگان سلولهای بنیادی ایران