کشت ویروس ها

کشت ویروس ها 

ویروس ها را هم مثل باکتری ها میتوانیم در ازمایشگاه خود کشت دهیم و انها را ایزوله کرده و یا برای اهداف درمانی استفاده کنیم. از انجا که ویروس ها ریزموجودات داخل سلولی اجباری هستند بنابراین سلول زنده در ازمایشگاه، برای رشد انها نیاز داریم.لاین های سلولی مختلفی برای کشت سلول ها در ازمایشگاه توسعه یافته است. یک لاین سلولی برای کشت کافی نیست. هر سلول خاص گیرنده ویژه ای در سطح سلول را نیاز دارد تا بتواند به سلول متصل شود و تقسیم نخستین را انجام دهد. حضور گیرنده خاص در سطح سلول تعیین می کند که چه نوع ویروسی سلول را آلوده کند به این اصطلاحا "viral cell tropism"می گویند. به این علت لاین های سلولی مختلف برای کشت ویروس ها و تشخیص انها در ازمایشگاه های خودمان باید نگه داری شوند. مشکل دیگر در کشت ویروس ها نگه داری این کشتها زنده به مدت زیاد دز ازمایشگاه است تا ویروس ها به طور مناسب رشد کنند. سوسپانسیونی از سلول ها در محیط رشد(متشکل از یکبافر به همراه سرم گوساله که منبع پروتئین و اسید امینه است و آنتی بیوتیک برای جلوگیری از رشد پیش از حد باکتری ها ) در داخل ظرف یا فلاسک/تیوب پلاستیکی قرار میگیرد سلول ها به اطراف ظرف متصل می شوند و تا زمانی که سرریز شوند رشد می کنند. نمونه بیمار بعدا اضافه می شود و در گرمخانه 37 درجه  برای رشد ویروس ها انکوبه می شوند (ویروس های تنفسی در دمای 33 درجه). رشد تیوب ها را  هر روز از نظر رشد ویروس ها بررسی می کنیم. اگر ویروس در کشت ها وجود داشته باشد سلول ها را خواهد کشت. با توجه به لاین سلولی و رشد سلولی در ان، کشتن سلول ها در محیط کشت همراه با ظاهر تیپیکی خاصی در ورقه سلولی هست. به این حالت اثر سایتوپاتیک یا CPE می گویند. یک ویروس شناس حرفه ای می تواند بر اساس همین خاصیت سایتوپاتیک ویروس ها را تشخیص دهد ولی تست های تائیدی مانند میکروسکوپ الکترونی، ایمونوفلورسنس ، خنثی سازی و .. نیاز است. محیط های کشت میتوانند از منیع انسانی و یا غیرانسانی باشند ولی به طور کلی به دو دسته زیر تقسیم بندی می شوند:

• پیوسته:سلول های جاودانه ای هستند که از سلول های توموری منشا گرفته اند. مثال:HeLa (human cervical cancer cell line), hep2 and Graham 293 cells (transformed human epithelial cell line
• اولیه: همان طور که از اسم ان مشخص است برای یک و یا چند چرخه محدود رشد استفاده می شود. این محیط ها حساس به عفونت با ویروس هستند و برخی ویروس ها مانند انفولانزا و VZV, CMV باید در انها کشت داده شوند. مثال:areMRC5 (human lung fibroblast cell line), PMK (primary monkey kidney cell line)

کشت ویروسیک روش بسیار حساسی است و نیازمند تکنیک های مختلفی است. بررسی نتایج می تواند چندین هفته طول بکشد. نمونه ها باید هر چه سریع تر به محیط کشت وارد شوند. برخی از ویروس ها مانند: hepatitis viruses, papilloma viruses, parvovirus B19, rotavirus و norovirus در محیط کشت رشد نمی کنند و برخی از ویروس ها مانند EBV and HIV نیازمند محیط کشت اختصاصی هستند و نباید در محیط های معمولی کشت داده شوند.

^{منبع: Clinical and Diagnostic Virology}